Методика определения активности аминотрансфераз
Активность АлАТ определяли с помощью тест-набора «Лахема».
Определение основано на измерении оптической плотности гидрозонов а -оксоглутаровой и пировиноградной кислоты в щелочной среде, возникающей при самопроизвольном декарбоксировании оксал-ацетата, обладает более высокой активностью.
Реактивы:
Субстрат АлАТ - DL-альфааланин 116 ммоль/л. 2 оксоглутарат 1,7 ммоль/л. фосфатный буфер рН 7,4 83 ммоль/л.
Реактив 2 - 2,4 динитрофенилгидрозин - р-р 1 ммоль/л в HCL 1 ммоль/л.
Раствор NaOH - 16 г/ 1л.
Раствор NaOH - 16 г/ 1л.
Физиологический раствор NaCl ( 900 мг/100 мл).
Проведение анализа.
Отмерить (мл). |
Проба |
Контрольный раствор |
Субстрат АлАТ Физиологический р-р. |
0,25 |
0,25 0,05 |
Инкубация точно 3 мин. при т-ре 37°С | ||
Сыворотка крови |
0,05 |
- |
Инкубация точно 60 мин. при т-ре 37°С | ||
Реактив 2. |
0,25 |
0,25 |
Инкубация 20 мин при комнатной температуре. | ||
Раствор NaOH |
2,50 |
2,50 |
Перемешивают и спустя 10 мин. измеряют оптическую плотность пробы против контрольного раствора. Измерение проводят на СФ - 46 при длине волны 530 нм.
Калибровочный график (СФ - 46Д = 530).