Материалы и методы исследования

При проведении индуцированного теста инкубированные с различными концентрациями Н2О2 и интактные нейтрофилы вносили в пробирки для микроанализа в объеме 200 мкл и 200 мкл 200 мкл суточной культуры St. aureus и инкубировали при температуре + 37˚С. Через 30, 60, 90, 120 и 150 минут из реакционной смести отбирали аликвоты клеточной суспензии (100 мкл) и вносили в пробирки с 500 мкл субстратной смеси состоящей из ортофенилендиамина (0,04%) и 0,002% перекиси водорода на фосфатно-цитратном буфере, pH=5,0. Через 30 мин реакцию останавливали добавлением 200 мкл 10 % серной кислоты., затем центрифугировали 15 мин при 2000 об/мин. Результаты оценивались спектрофотометрически при длине волны 492 нм.

Оценка изменения динамического состояния мембраны полиморфноядерных гранулоцитов

При проведении индуцированного теста инкубированные с различными концентрациями H2O2 и интактные нейтрофилы вносили в пробирки для микроанализа в объеме 200 мкл и 200 мкл суточной культуры St. aureus и инкубировали при температуре + 37˚С. Через 30, 60, 90, 120 минут из реакционной смести отбирали аликвоты клеточной суспензии (100 мкл) и помещали в лунки плоскодонного 96-луночного планшета, инкубировали в течение 20 минут при 37 ˚С, трижды промывали рабочим буфером. В качестве контроля использовали пробу с суспензией культуры St. aureus, которую проводили через все стадии анализа. Клетки фиксировали этанолом, вносили в каждую лунку по 200 мкл красителя Романовского-Гимзы, икубировали при комнатной температуре в течение 20 минут, затем краситель удаляли, а планшет трижды промывали. Для экстракции красителя использовали 200 мМ уксусную кислоту. Учет реакции проводили спектрофотометрически при длине волны 650 нм.

Статистическая обработка результатов

Статистическая обработка полученных экспериментальных данных проводилась с использованием пакета программ Statistica 6.0. Оценка достоверности полученных результатов, не подчиняющихся закону нормального распределения, проводилась с использованием анализа ANOVA по Фридману и критерия Вилкоксона для зависимых групп. Различия считали достоверными при уровне значимости 0,05. Полученные данные представлены в виде медианы и 25-75 квартилей.